1    微量波動(dòng)Ames試驗簡(jiǎn)介

1.1 Ames試驗發(fā)展歷程

細菌回復突變試驗（Bacterial Reverse Mutation Test) ，亦稱(chēng)Ames試驗，于1975年由美國加利福尼亞大學(xué)伯克利分校生化系B.N.Ames教授實(shí)驗室建立并不斷發(fā)展完善，至今已成為基因毒性測試中應用尤為廣泛的一種方法，通常是體外毒理學(xué)測試的第一步，廣泛應用于化合物的致突變性和潛在致癌性的初篩檢驗。近幾年，將M.H.L. Green等人創(chuàng )建的大腸桿菌回復突變試驗引入其中，形成現在較為成熟的細菌回復突變試驗（包括鼠傷寒沙門(mén)氏菌細菌回復突變試驗和大腸桿菌細菌回復突變試驗）。

1976年Green等通過(guò)改良建立了Ames波動(dòng)試驗（Ames Fluctuation Test），它用液體培養基代替固體培養基，以觀(guān)察培養管的濁度或pH指示劑的顏色變化代替菌落計數，其敏感性高于A(yíng)mes試驗。

微量波動(dòng)Ames試驗試驗（Micro-titre Fluctuation Ames Test）試驗是在A(yíng)mes波動(dòng)試驗的基礎上發(fā)展而來(lái)的，由Gatehouse于1978年改良并不斷推廣，用96孔培養板進(jìn)行試驗，以觀(guān)察pH指示劑的顏色變化指示結果，提高了靈敏度、并降低了化合物的用量。

后來(lái)，Gee等通過(guò)開(kāi)發(fā)新菌株，建立了AmesⅡ試驗，Gee等開(kāi)發(fā)的6種沙門(mén)氏菌株（TA7001～TA7006）在組氨酸合成操縱子上各有一個(gè)*的點(diǎn)突變，這6種點(diǎn)突變包含了所有點(diǎn)突變的可能性，將6種菌株混合在一起（Tamix），即能夠檢測出所有可以誘發(fā)點(diǎn)突變的化合物，再配合一種傳統Ames試驗中采用的菌株TA98（用于檢測移碼突變），就可以檢測出可以誘發(fā)點(diǎn)突變和移碼突變的化合物。

1.2 傳統Ames試驗與微量波動(dòng)Ames試驗比較

傳統 Ames 試驗是對致癌物預測性遺傳毒性試驗，是藥物遺傳毒性初篩的方法，也是QSAR構效關(guān)系建立的遺傳毒性數據庫的重要數據基礎。傳統的Ames平板滲入法采用半固體培養液，在有外源致突變物存在的情況下，組氨酸/色氨酸缺陷型菌株發(fā)生回復突變，回復為野生型，可在無(wú)組/色氨酸的培養基上生長(cháng)，故可根據菌落形成數量，檢查受試物是否為致突變物。然而，開(kāi)展傳統的Ames試驗需4~5種菌株，試驗過(guò)程涉及到培養大量的瓊脂平板以及繁復的平板菌落計數等，耗費實(shí)驗材料多，費時(shí)費力，且受試化合物用量大，敏感性低的缺點(diǎn)。

相比傳統的Ames試驗方法，微量波動(dòng)Ames試驗采用了液態(tài)96孔板培養的方法，在微孔板中進(jìn)行受試物和菌株的孵育，利用培養基中的特殊指示劑溴甲酚紫顯色。當孔中有回復突變的菌株生長(cháng)使培養基pH值降低時(shí)，指示劑由紫色變?yōu)辄S色。外源化合物致突變能力越強，變色的孔數越多。通常，微量波動(dòng)Ames試驗選用TA98和TA100兩種菌株作為測試菌株，試驗結果可通過(guò)計數變色的孔數或用酶標儀直接讀數，省去了平板菌落計數的繁瑣和耗時(shí)的過(guò)程，且因其試驗的全液體環(huán)境，使得試驗靈敏度更高。

1.3 微量波動(dòng)Ames試驗的優(yōu)勢

l  高通量

微量波動(dòng)Ames試驗過(guò)計數黃色孔的數量來(lái)反映受試物的致突變性，從而省去了平板制作和菌落計數等步驟，可實(shí)現高通量、自動(dòng)化，具有節省耗材、節約藥量、縮短試驗周期、結果客觀(guān)、適宜大量藥物篩選的優(yōu)點(diǎn)。

l  高靈敏度

波動(dòng)試驗比平板試驗靈敏，其主要原因可能是：①在波動(dòng)試驗中細菌可在低濃度的誘變劑中處理較長(cháng)時(shí)間；在平板試驗中受測化學(xué)物將擴散至底層瓊脂而被稀釋?zhuān)虼水a(chǎn)生同樣效應需更高的起始濃度，而有些化學(xué)物濃度增高后又會(huì )導致毒性效應。②液體培養有利于S9組份酶活性的正常發(fā)揮，在平板試驗中可溶性酶擴散入底層瓊脂會(huì )擾亂酶的代謝活力。

l  化合物用量少

Ames波動(dòng)試驗是用96孔板進(jìn)行試驗，化合物用量少，可作為新藥開(kāi)發(fā)的早期，受試物樣品種類(lèi)多、產(chǎn)量少或受試物較珍貴時(shí)評價(jià)遺傳毒性的快速方法。

2    IPHASE微量波動(dòng)Ames試劑盒

IPHASE/匯智和源順應遺傳毒理研究的需求，通過(guò)多年的開(kāi)發(fā)和優(yōu)化，推出了微量波動(dòng)Ames試劑盒，為遺傳毒理學(xué)研究提供了便捷的產(chǎn)品。

圖1 IPHASE微量波動(dòng)Ames試驗試劑盒試驗結果

2.1 微量波動(dòng)Ames試劑盒組成

 IPHASE/匯智和源微量波動(dòng)Ames試劑盒由A盒和B盒兩個(gè)包裝組成，包含了進(jìn)行試驗所需的所有試劑和主要耗材，使用簡(jiǎn)單、便捷。

2.2   微量波動(dòng)Ames試劑盒優(yōu)勢

l  便捷性 

省去誘導S9制備、菌株培養和鑒定、試劑配制時(shí)間，可以直接使用，大大縮短了實(shí)驗周期。

l  準確性 

試劑盒各成分均經(jīng)過(guò)嚴格的質(zhì)量檢測，實(shí)驗結果準確、可靠、重現性高。

l  高效性 

利用顯色原理判斷受試物的致突變性，大大減少計數工作。

l  穩定性 

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本試劑盒穩定性強、易于運輸和保存。

l  應用廣 

應用范圍廣，可用于食品、藥品、化妝品、化學(xué)品、保健品、農藥等的遺傳毒性研究

3    相關(guān)產(chǎn)品

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗，推出了多領(lǐng)域、多種類(lèi)的科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品。

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匯智和源，致力于為創(chuàng )新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學(xué)研究機構提供高品質(zhì)的生物試劑，IPHASE為公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”