試劑盒是用于盛放檢測化學(xué)成分、藥物殘留、病毒種類(lèi)等化學(xué)試劑的盒子。一般醫院、制藥企業(yè)使用。
ELISA大致分為五種類(lèi)型:直接法、間接法、競爭法、夾心法、捕獲包被法。在商品化試劑盒中用得比較多的是雙抗體夾心法、競爭法和間接法。
夾心法
雙抗體夾心法是夾心法中的一種主要形式,夾心法分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法:
雙抗體夾心法中抗原的2個(gè)不同的抗原表位被兩個(gè)抗體-捕捉抗體和檢測抗體,分別結合。捕捉抗體固定于載體即酶標板上,檢測抗體通過(guò)結合抗原進(jìn)行顯色分析。
應用于雙抗體夾心法檢測的捕捉抗體通常是單抗,偶爾有用多抗做為捕捉抗體的情況,但很少見(jiàn),因為以多抗作為捕捉抗體容易出現交叉反應而降低特異性。
檢測抗體通常為多抗,在商業(yè)化的科研試劑盒中經(jīng)常用到生物素標記的山羊多抗,再讓生物素標記的多抗與HRP標記的親和素或者鏈霉親和素結合,然后再加HRP也就是辣根過(guò)氧化物酶的底物,通常是TMB反應顯色,這種方法是在傳統的HRP酶標記抗體的雙抗體夾心法ELISA中引入了生物素-親和素放大系統。
競爭法
競爭法也是一種很常用的方法,一起看看:
競爭法是用樣本中的游離抗體/抗原與固相的酶標抗體/抗原競爭性結合的分析方法。當游離抗體(或抗原)濃度越高,則能與固定抗原(或抗體)結合的酶標抗體(或抗原)就越少,后續顯色就越淺,即與對照相比,顯色越淺,表示檢測樣本中抗體(或抗原)含量越高。
該法特別適合小分子物質(zhì)的檢測也可用于檢測比較不純的樣本,且重復性好,但是檢測的靈敏度和專(zhuān)一性較差。競爭法測抗原常用于檢測小分子抗原及半抗原,這類(lèi)抗原通常缺乏兩個(gè)以上的識別位點(diǎn),不適用于雙抗夾心法進(jìn)行測定。該方法在商業(yè)化試劑盒中被廣泛運用。
間接法
間接法只能用于測定抗體,主要用于疾病的診斷,其優(yōu)點(diǎn)是只需要改變包被抗原,酶標抗體是通用的。間接法使用了二抗增加信號強度,也使抗體的選擇多樣化,然而間接法容易產(chǎn)生交叉反應。