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彗星試驗的原理是怎樣的?

更新時(shí)間:2022-01-17      點(diǎn)擊次數:3216
  彗星實(shí)驗也稱(chēng)單細胞凝膠電泳試驗,是一種有效評估DNA損傷的方法。其原理是器官或組織經(jīng)處理(如輻射、重金屬等)后,細胞中的DNA發(fā)生單鏈或雙鏈斷裂,經(jīng)細胞及其核膜裂解后,DNA解旋,在電場(chǎng)作用下,DNA斷片遷移出細胞核,形成彗星狀的電泳圖譜。正常細胞的大分子DNA在電場(chǎng)作用下遷移距離較短,DNA仍保留在細胞核的范圍,形成圓形或輕微拖尾的圖譜。根據電泳緩沖液的pH值不同,可分為中性彗星實(shí)驗(pH=8.4)和堿性彗星實(shí)驗(pH>13)。中性彗星實(shí)驗主要用于檢測DNA雙鏈的斷裂損傷,堿性彗星實(shí)驗具有更高的靈敏性,可用于檢測更少量的單鏈和雙鏈斷裂損傷。

 

彗星試驗
 

 

  需要注意的是,試驗過(guò)程中的個(gè)方面,包括樣品準備、電泳條件、視覺(jué)分析參數(如染色強度、顯微鏡光強度以及使用顯微鏡濾鏡和相機動(dòng)態(tài)和環(huán)境條件(如背景照明)已經(jīng)被研究,可能影響DNA遷移。
  每個(gè)實(shí)驗室都應證明能夠為所使用的目標組織獲得足夠質(zhì)量的單細胞或細胞懸浮液,從而在彗星試驗(cometassay)中建立實(shí)驗能力。匯智泰康擁有多年毒理學(xué)服務(wù)與產(chǎn)品研發(fā)經(jīng)驗,針對不同遺傳毒性試驗開(kāi)發(fā)針對試劑盒,包括彗星試驗試劑盒。首先通過(guò)%尾DNA的評價(jià),對照處理組動(dòng)物%尾DNA在低范圍內。目前的數據表明,尾部DNA百分比(基于平均中位數)在大鼠肝臟應該最好不要超過(guò)6%,這將是符合JaCVAM驗證試驗的值和其他出版和私有數據。目前還沒(méi)有足夠的數據對其他組織的最佳或可接受范圍提出建議。這并不排除合理使用其他組織。測試報告應根據已發(fā)表的文獻或專(zhuān)有數據,對彗星試驗在這些組織中的性能進(jìn)行適當的審查。首先,在對照組中,需要一個(gè)較低的%尾DNA范圍,以提供足夠的動(dòng)態(tài)范圍來(lái)檢測陽(yáng)性的影響。其次,每個(gè)實(shí)驗室都應能夠按照不同方式,對直接誘變劑和促進(jìn)劑的反應。
 
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