PPB即表示與血漿蛋白結合形成結合態(tài)藥物的比例。游離藥物假說(shuō)認為僅有游離態(tài)的藥物才能擴散透過(guò)生物膜，到達靶部位發(fā)揮藥效；另外游離藥物的比例還顯著(zhù)影響藥物分布、代謝和排泄的過(guò)程，PPB與藥物的諸多藥理性質(zhì)均有關(guān)。

　　影響PPB測定的因素很多，如溶解度、溫度、非特異性結合、酯酶代謝等，需根據化合物的特征，結合研究的實(shí)際目的，選擇合適的測定方法反應真實(shí)的化合物特性。需根據化合物預期治療濃度，個(gè)性化的制定試驗濃度，必要時(shí)進(jìn)行不同濃度條件下的PPB測定。其中對于*蛋白結合率的化合物，試驗的微小偏差即會(huì )對結果造成較大的相對偏差，此時(shí)還需要同步優(yōu)化精密度更高的LC-MS/MS、放射性等檢測分析技術(shù)。

　　平衡透析法目前是常用的方法，但也存在一定的缺陷，如初始平衡狀態(tài)的改變、非特異性結合、體積變換、Donnan效應和蛋白滲漏等。

　　初始平衡狀態(tài)的改變是指當游離藥物穿過(guò)半透膜時(shí)會(huì )形成新的游離態(tài)-結合態(tài)的平衡，由此造成試驗設置濃度與實(shí)際平衡濃度的差異，對于PPB存在濃度依賴(lài)特性的化合物可能造成結果的偏差。

　　非特異性結合是指藥物與半滲透膜等試驗裝置的結合，可能造成游離藥物濃度的低估，進(jìn)而影響試驗結果。通常采用聚四氟乙烯(Teflon)制造的試驗裝置以降低非特異性結合的影響。如果非特異性結合現象比較嚴重建議采用超速離心法。

　　體積轉換是指液體在膠體滲透壓的作用下從buffer側移動(dòng)至蛋白側，由此稀釋蛋白濃度對結合率較低的化合物試驗結果造成影響。當液體轉換比例低于10%時(shí)該效應幾乎忽略，孵育時(shí)間超過(guò)4h可能會(huì )加劇該效應，可以通過(guò)在buffer側加入右旋糖酐以平衡兩側滲透壓。

　　Donnan效應是指吉布斯-唐南效應，是指帶電粒子不通過(guò)半透膜而產(chǎn)生不均勻的電荷，使兩側粒子濃度不一致。尤其對于高離子化且低蛋白結合的藥物，該效應最為明顯，該效應可以通過(guò)增加buffer側電解質(zhì)的濃度來(lái)弱化。

　　當半透膜完整性出現問(wèn)題時(shí)會(huì )發(fā)生蛋白滲漏現象，對于高蛋白結合率化合物，由此會(huì )造成游離藥物比例的顯著(zhù)高估，尤其在孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)時(shí)易發(fā)生。